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熒光顯微鏡激發(fā)熒光的方式有哪些?

更新時(shí)間:2021-06-29      點(diǎn)擊次數(shù):617
  熒光顯微鏡是免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的基本工具。是由光源、濾板系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成。熒光顯微鏡利用一定波長(zhǎng)的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光,通過(guò)物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標(biāo)本的熒光圖像。細(xì)胞中有些物質(zhì),如葉綠素等,受紫外線(xiàn)照射后可發(fā)熒光;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線(xiàn)照射亦可發(fā)熒光,熒光顯微鏡就是對(duì)這類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一。
  熒光顯微鏡是免疫熒光組織化學(xué)的基本工具。它是由超高壓光源、濾片系統(tǒng)(包括激發(fā)和壓制濾板)、光學(xué)系統(tǒng)和攝影系統(tǒng)等主要部件組成,是利用一定波長(zhǎng)的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光。
  熒光顯微鏡激發(fā)熒光的方式:按光的波長(zhǎng)范圍分為UV激發(fā)法(使用紫外線(xiàn)照明法)和BV激發(fā)法(使用藍(lán)紫光)兩種。
  UV激發(fā)法是用短于400nm外光進(jìn)行激發(fā)。該法不存在可見(jiàn)的激發(fā)光,所以被觀察的熒光呈現(xiàn)該染料固有的熒光,容易判別標(biāo)本上的特異熒光和背景組織的自身熒光。
  BV激發(fā)法是以404nm、434nm為中心的由紫外至藍(lán)光進(jìn)行激發(fā)。該方法使用藍(lán)光照射標(biāo)本,所以熒光顯微鏡的截止濾光片必須使用可*阻斷藍(lán)光并可充分通過(guò)所需綠、黃熒光的濾光片。用于熒光抗體法的熒光色素。對(duì)于激發(fā)光的極大吸收波長(zhǎng)和熒光的極大發(fā)光波長(zhǎng)比較接近,所以BV激發(fā)法使用的濾光片必須使用銳截止式濾光片。該法可用藍(lán)光作為激發(fā)光,所以熒光色素的吸收效率較高,可得到較明亮的圖像。其缺點(diǎn)是500nm以下的熒光無(wú)法看到,而500nm以上的使整個(gè)圖像顯黃色。在熒光抗體法中,大多以熒光色素*的顏色來(lái)判斷其特異性,所以在討論微妙的特異性時(shí),上述BV激發(fā)法的缺點(diǎn)往往影響大。
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