講述共聚焦顯微鏡TCS SP8的操作步驟
更新時(shí)間：2018-10-22 點(diǎn)擊次數(shù)：1152
共聚焦顯微鏡TCS SP8包括LED光源、旋轉(zhuǎn)多針孔盤(pán)、帶有壓電驅(qū)動(dòng)器的物鏡和CCD相機(jī)。LED源通過(guò)多針孔盤(pán)（MPD）和物鏡聚焦到樣品表面上，從而反射光。反射光通過(guò)MPD的針孔減小到聚焦的部分，這落在CCD相機(jī)上。來(lái)自傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡的圖像包含清晰和模糊的細(xì)節(jié)。相反，在共焦圖像中，通過(guò)多針孔盤(pán)的操作濾除模糊細(xì)節(jié)（未聚焦）。只有來(lái)自焦平面的光到達(dá)CCD相機(jī)。因此，共聚焦顯微鏡能夠在納米范圍內(nèi)獲得高分辨率。每個(gè)共焦圖像是通過(guò)樣品的形貌的水平切片。在不同的焦點(diǎn)高度捕獲圖像產(chǎn)生這樣的圖像的堆疊，通過(guò)共焦顯微鏡通過(guò)壓電驅(qū)動(dòng)器通過(guò)物鏡的垂直位移來(lái)實(shí)現(xiàn)。200到400個(gè)共焦圖像通常在幾秒內(nèi)被捕獲，之后軟件從共焦圖像的堆棧重建的三維高度圖像。
共聚焦顯微鏡TCS SP8的操作步驟：
1.開(kāi)啟儀器電源及光源：一般先開(kāi)啟顯微鏡和激光器，再啟動(dòng)計(jì)算機(jī)，然后啟動(dòng)操作軟件，設(shè)置熒光樣品的激發(fā)光波長(zhǎng)，選擇相應(yīng)的濾光鏡組塊。以便光電倍增管(photo multiplier tube，PMT)檢測(cè)器能得到足夠的信號(hào)結(jié)果。使用汞燈的注意事項(xiàng)同普通熒光顯微鏡。
2.設(shè)置相應(yīng)的掃描方式：在目視模式下．調(diào)整所用物鏡放大倍數(shù)，在熒光顯微鏡下找到需要檢測(cè)的細(xì)胞。切換到掃描模式，調(diào)整雙孔針和激光強(qiáng)度參數(shù)，即可得到清晰的共聚焦圖像。
3.獲取圖像：選擇合適的圖像分辨率，將樣品完整掃描后，保存圖像結(jié)果即可。
4.關(guān)閉儀器：儀器測(cè)定樣品結(jié)束后，先關(guān)閉激光器部分，計(jì)算機(jī)仍可繼續(xù)進(jìn)行圖像和數(shù)據(jù)處理。若要退出整個(gè)共聚焦顯微鏡TCS SP8系統(tǒng)，則應(yīng)該在激光器關(guān)閉后，待其冷卻至少10分鐘后再關(guān)閉計(jì)算機(jī)及總開(kāi)關(guān)。
共聚焦顯微鏡TCS SP8是一項(xiàng)高分辨率三維光學(xué)成像技術(shù)，主要特點(diǎn)在于其光學(xué)分層能力，即獲得特定深度下焦點(diǎn)內(nèi)的圖像，圖像通過(guò)逐點(diǎn)采集，以及之后的計(jì)算機(jī)重構(gòu)而成，因此它可以重建拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)復(fù)雜的物體。
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