德國(guó)徠卡 共聚焦顯微鏡 STELLARIS 8 FALCON FLIM 熒光壽命成像顯微鏡

清晰的對(duì)比，即時(shí)產(chǎn)生壽命成像

德國(guó)徠卡 共聚焦顯微鏡 STELLARIS 8 FALCON FLIM 熒光壽命成像顯微鏡（FAst Lifetime CONtrast，快速壽命對(duì)比）是功能成像的未來(lái)發(fā)展方向。 利用熒光壽命成像的強(qiáng)大性能來(lái)研究細(xì)胞生理學(xué)并探索活細(xì)胞動(dòng)力學(xué)。 STELLARIS 8 FALCON 是一款整合的熒光壽命成像 (FLIM) 解決方案，以視頻速率進(jìn)行熒光壽命成像來(lái)研究活細(xì)胞的快速動(dòng)力學(xué)。

STELLARIS 8 FALCON 為您的成像增加了一個(gè)新的對(duì)比維度，實(shí)現(xiàn)生物傳感以及跟蹤蛋白質(zhì)之間的相互作用。 現(xiàn)在，熒光壽命成像信息可用于STELLARIS 8 系統(tǒng)的所有模塊。

您現(xiàn)在可以：

通過(guò) FLIM-FRET（熒光共振能量轉(zhuǎn)移）跟蹤分子間的快速相互作用。

使用生物傳感器檢測(cè)代謝狀態(tài)和微環(huán)境的變化

通過(guò)壽命對(duì)比區(qū)分多個(gè)熒光團(tuán)

經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的培訓(xùn)即可獲得熒光壽命成像數(shù)據(jù)

貓眼組織切片。 同時(shí)進(jìn)行的光譜（灰色）和 FLIM（彩色）共聚焦成像顯示了壽命對(duì)比情況。 使用 STELLARIS 8 FALCON 和 LAS X 軟件采集和顯示。

通過(guò) FLIM-FRET 跟蹤分子間相互作用

現(xiàn)代科研工作研究分子間如何進(jìn)行相互作用來(lái)完成重要任務(wù)。 FLIM-FRET 是探索這種相互作用的金標(biāo)準(zhǔn)。

STELLARIS 8 FALCON 為 FLIM 儀器設(shè)定了新的速度標(biāo)準(zhǔn)。

它能在高度動(dòng)態(tài)的細(xì)胞事件中完成熒光共振能量轉(zhuǎn)移 (FRET)實(shí)驗(yàn)。 您可以在日常實(shí)驗(yàn)中采集和分析 FRET 數(shù)據(jù)。

HeLa 細(xì)胞中的籠鎖cAMP，表達(dá) EPAC mT2-dVenus FRET 傳感器。 EPAC對(duì)紫外線介導(dǎo)的cAMP解籠鎖的反應(yīng)（中心區(qū)域）。 視頻采集速度4幀/秒。 圖像大?。?256 x256 像素。 顏色條的尺度（壽命）：ns。 由荷蘭阿姆斯特丹癌癥研究所的Kees Jalink和Bram van den Broek提供。

用生物傳感器監(jiān)測(cè)細(xì)微而快速的變化

生物傳感器是代謝活動(dòng)、信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制、酸堿度和微環(huán)境變化的強(qiáng)大報(bào)告元件。

STELLARIS 8 FALCON 可提供熒光壽命中包含的信息，即使在膜電位動(dòng)力學(xué)這類高速事件中也不例外。 這些信息是 STELLARIS 8 系統(tǒng)提供的光譜熒光強(qiáng)度成像和TauSense模式的有力補(bǔ)充。

用活化肽刺激后的鈣振蕩。 單個(gè)細(xì)胞中的響應(yīng)被記錄為壽命變化。 視頻以4 pfs速率拍攝。 圖像大小： 256 x 256個(gè)像素。 顏色條的尺度（壽命）：ns。 由荷蘭阿姆斯特丹癌癥研究所的Kees Jalink和Bram van den Broek提供。

更可靠、更靈敏的代謝成像

自發(fā)熒光 在傳統(tǒng)成像中可能是一個(gè)問(wèn)題。 STELLARIS 8 FALCON 可將其轉(zhuǎn)化為有價(jià)值的信息。 您現(xiàn)在可以將自發(fā)熒光轉(zhuǎn)化為代謝狀態(tài)、細(xì)胞分化和癌癥發(fā)展的報(bào)告元件。

此外，STELLARIS 8 FALCON 能夠?qū)罱M織進(jìn)行成像對(duì)比，而熒光標(biāo)記通常是非特異性的，或者會(huì)破壞生理?xiàng)l件。

非生理?xiàng)l件下哺乳動(dòng)物細(xì)胞的自發(fā)熒光 （酸堿度為 8.5）。 信號(hào)與內(nèi)源性 NAD/NADH 的變化相關(guān)。 氧化應(yīng)激的發(fā)展表現(xiàn)為熒光壽命隨時(shí)間縮短。 原始圖像大?。?512 x 512 像素。 顏色條的尺度（壽命）：ns。

超越光譜選項(xiàng)的熒光基團(tuán)分離

熒光標(biāo)記是區(qū)分細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)方法。 光譜分離方法非常強(qiáng)大，但有時(shí)當(dāng)發(fā)射光譜太接近時(shí)，這個(gè)方法就會(huì)受到限制。

使用 STELLARIS 8 FALCON，您可以充分利用熒光壽命成像的潛力，使用指數(shù)擬合、譜圖擬合和新的 FLIM 相量分離分析功能來(lái)分離多個(gè)熒光探針。

交互式圖像： 通過(guò)壽命對(duì)比加以區(qū)分的細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)。 波形蛋白用Alexa Fluor 555（綠色）免疫標(biāo)記，微管蛋白用Alexa Fluor 546（藍(lán)色）免疫標(biāo)記。 熒光基團(tuán)的光譜非常相似，但它們可通過(guò)熒光壽命信息區(qū)分。 圖像大?。?512 x 512 像素。

強(qiáng)度FLIM

使用 STELLARIS 8 FALCON 進(jìn)行快速壽命成像

STELLARIS 8 FALCON 顯微鏡克服了FLIM的速度限制，可快速提供壽命數(shù)據(jù)。

到目前為止，由于FLIM的技術(shù)限制，從快速過(guò)程的熒光壽命數(shù)據(jù)中獲取功能信息仍有很大難度。 FLIM采集速度比記錄共聚焦強(qiáng)度至少慢10倍。

使用 STELLARIS 8 FALCON 快速熒光壽命對(duì)比成像， 您能夠以適當(dāng)?shù)乃俣雀櫦?xì)胞的動(dòng)態(tài)過(guò)程。 這是因?yàn)椴捎昧艘环N新的時(shí)間測(cè)量方法，即采用 TCSPC（時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)）技術(shù)和智能的數(shù)據(jù)處理和分析算法。

《自然》網(wǎng)站上的應(yīng)用指南： SP8 FALCON：熒光壽命成像的新概念，實(shí)現(xiàn)視頻速率的共聚焦熒光壽命成像

含有Alexa Fluor 555（綠色）溶液中的熒光珠（品紅色）單通道圖像。 基于熒光壽命的熒光基團(tuán)分離可以在不同的速度下進(jìn)行，例如 16幀/秒（上）、27幀/秒（視頻速率，中）和 83幀/秒（超快，下）。 通過(guò)壽命信息進(jìn)行染料分離明顯比強(qiáng)度信息（灰度）更有優(yōu)勢(shì)。 視頻展示了壽命組分的逐像素?cái)M合。 幀大?。?512 x 64 像素。 比例尺： 10微米。

一體化的多模態(tài)成像

STELLARIS 8 FALCON 使 FLIM 與其他模態(tài)的結(jié)合變得十分簡(jiǎn)單。 一直以來(lái)，研究人員都不得不處理復(fù)雜的布線和繁瑣的文件傳輸工作。 使用 STELLARIS 8 FALCON，您可以將壽命信息整合到標(biāo)準(zhǔn)的共聚焦工作流程中。

STELLARIS 8 FALCON 可

整合到 LAS X 采集與分析軟件中。 它既可以同時(shí)記錄4個(gè)光譜通道，又可先后記錄多達(dá)10個(gè)通道的熒光壽命成像。 使用 STELLARIS 8 FALCON，您能夠在 3D 層掃、延時(shí)序列乃至大型拼接成像方式中獲得熒光壽命信息。

使用  LAS X NAVIGATOR，您可以將觀察區(qū)域擴(kuò)大10,000 倍，更快地識(shí)別感興趣的區(qū)域，以全新的方式研究樣本。

輕松采集復(fù)雜樣本。 高分辨率小鼠胚胎成像，由包含1.9億像素的722張圖像拼接而成。 通過(guò)四個(gè)

熒光壽命擬合的FLIM數(shù)據(jù)，彩色編碼。 采集時(shí)間： 1小時(shí)23分。 分析時(shí)間： 1小時(shí)

通過(guò)相量簡(jiǎn)單確定壽命

使用 STELLARIS 8  FALCON 的 FLIM 相量圖進(jìn)行分析，可顯示壽命分量的 2D 圖。 通過(guò) FLIM 相量分析，您可以跟蹤微環(huán)境變化，選擇多路信號(hào)的組分來(lái)確定 FRET 效率。

Alexa555-鬼筆環(huán)肽和 H2B-mCherry 標(biāo)記的細(xì)胞。 使用 FLIM phasors 執(zhí)行組分離。 相量圖清晰地顯示了兩種壽命分布。 樣本提供方： 德國(guó)康斯坦茨大學(xué)生物系 Martin St?ckl 博士。 

只需點(diǎn)擊一下即可獲得您需要的結(jié)果

使用 LAS X 軟件，只需點(diǎn)擊一下即可獲得熒光壽命成像，方法與常規(guī)光譜成像相同。

即使您將顯微鏡當(dāng)作一種輔助技術(shù)，您也可以找到重要的內(nèi)容，并立即開(kāi)始成像。

更專業(yè)的功能可作為工作流程提供，為您實(shí)現(xiàn)方便的自動(dòng)化工作。

一鍵式設(shè)計(jì)，讓您能夠?qū)Ｗ⒂诳茖W(xué)研究： 由 LAS X 軟件控制的 STELLARIS 8 FALCON